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琼脂糖凝胶电泳实验原理

琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA 分子的迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA 分子的迁移速度与相对分子量成反比。

不同构型的 DNA 分子的迁移速度不同。如环形 DNA 分子样品,其中有三种构型的分子:超螺旋分子(cccDNA)、开环分子(ocDNA)、和线形 DNA 分子(IDNA)。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA>IDNA>ocDNA。

核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质。琼脂糖是一种聚合链线性分子;聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)在 N,N,N′-四甲基乙二an(TEMED)和过硫酸胺(AP)的催化下聚合形成长链,并通过交联剂 N,N′-亚甲双丙烯酰胺(Bis)交叉连接而成。琼脂糖凝胶适合分离200bp至近50kb的DNA片段,而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段(5bp-500bp)的分离效果很好,且分辩力极高。选择不同浓度的凝胶,可以分离不同大小范围的 DNA 分子。电场强度愈大,带电颗粒的运动越快。但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小,所以电泳时一般采用低电压,不超过 6V/cm。而对于大片段电泳,可以选择 0.5-1.0V/cm 电泳过夜。如果选择高电压电泳,可使用聚丙烯酰胺凝胶。

步骤我就不多说啦,下面来看看常见的问题有哪些。

 

众所周知,Lonza是世界上久负盛名的琼脂糖源生产商,其所产琼脂糖质量上乘、畅销全球,深受工业生产和科研用户的欢迎。选择正确的琼脂糖就等于配了一把保险锁,帮助您把实验误差降至,实验结果更漂亮,更重要的是降低您的实验成本!

SeaKem® Gold Agarose是一种高凝胶强度,低EEO(电渗),标准凝胶温度的琼脂糖。SeaKem® Gold Agarose琼脂糖属于遗传技术级别, 适用于在脉冲场凝胶电泳实验(PFGE)中快速分离巨大碱基对DNA。低电渗性能使得其在凝胶电泳实验中DNA电泳迁移率明显大于使用传统琼脂糖,调节缓冲液和琼脂糖浓度可以使跑胶时间减少一半。高凝胶强度使其在低浓度时很容易操作,能够使用传统电泳分离大DNA片段,减少分离 DNA片段时间(PFGE)。

 

 

 

 

产品名称:SeaKem® Gold琼脂糖粉

产品货号:50150

 

性能

  • 高凝胶强度;
  • 低EEO(电渗)≤05
  • 脉冲场凝胶电泳中可分离DNA50kb-10Mb
  • 垂直电泳中可快速分离DNA30kb-50kb

 

 关于这些参数的内涵: 

  1. 凝胶强度:衡量琼脂糖性能的关键参数,凝胶强度越高,凝胶性能越好,可以保证在低浓度下,凝胶性能依然很好,高凝胶强度琼脂糖适合大分子核酸。SeakemGold Agarose 凝胶强度高,可在0.3%、0.5%的浓度下分离超大片段核酸。

 

 

  1. 低电渗(LowEEO):电渗是一种物理现象,由于琼脂糖这样的多孔支持物在电场中会吸附水中的正负离子,而使溶液带电向电极泳动,从而干扰核酸或蛋白电泳, Lonza  Seakem  Gold  Agarose金琼脂糖是低电渗≤0.05,几乎不干扰核酸电泳。

 

 

应用:

  • 分析长片段PCR 产物
  • 分离和进一步操作DNA >1,000 bp
  • DNA& RNA 的分析电泳
  • DNA & RNA印迹

 

 

产品参数:

› Gelling temperature (1.5%) ――36°C ±1.5°C

› Melting temperature (1.5%)―― >90°C

› Gel strength (1%)―― >1,800 g/cm²

› Gel strength (1.5%)―― >3,500 g/cm²

 

产品货号        产品名称

 

50111 SeaPlaque GTG AGAROSE琼脂糖粉 25G

50110 SeaPlaque GTG AGAROSE琼脂糖粉 125G

50091  NuSieve 3:1 Agarose琼脂糖粉 25g

50090  NuSieve 3:1 Agarose琼脂糖粉 125g

50094  NuSieve 3:1 Agarose琼脂糖粉 500g

50101 SeaPlaque AGAROSE琼脂糖粉 25G

50100 SeaPlaque AGAROSE琼脂糖粉 125G

 

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