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如何完成EV隔离

细胞外囊泡(ev)是细胞分泌的纳米颗粒,主要参与细胞间通讯过程。在过去的几年里,EV获得了越来越多的兴趣从科学界,成为一个多学科的研究领域。电动汽车具有由于纳米尺寸和生物活性含量所产生的独特的物理化学性质。EV能够跨越多种生物屏障,比如细胞膜和血脑屏障,它们参与了许多病理过程。基于这些原因,EV前景广阔,应用于药物靶点、治疗药物、生物标志物和给药载体。

将EV用于科学和医疗应用的一个主要挑战是隔离过程,因为EV可以在各种复杂的生物基质中找到,这些基质是由大量的在尺寸和密度上重叠的纳米生物材料。
常用的隔离技术ev与其他流体组分的分离是超离心法(UC),即密度梯度(DG),阻垢层析(SEC)。然而,这些方法可能是有限的输入量、时间消耗和电动汽车产量。例如UC协议能够处理体积较大(可达1.5 L),但回收率较低[15,16],且耗时较长离心步骤,经常破坏EV,并引起共沉淀污染物。虽然DG和SEC通常会产生纯度高的EV配方,这些方法耗费时间,导致低收益,并且需要较小的体积(小于
5毫升)。此外,上述方法的临床实际操作具有挑战性临床级生产的无菌和放大要求。因此,改进技术能够以可扩展、可再生和无菌的方式浓缩EV,这对未来是必要的临床翻译。

在过去的几年里,用于纯化合成纳米粒子、蛋白质、液体悬浮液中的病毒也被用于EV分离。这些新兴EV的分离方法主要是利用抗原-抗体结合亲和力、高性能液体色谱法或过滤。例如,场流分馏(FFF)]和非对称流场流分馏(AF4)依赖于作用于流经的液体悬浮液的场管式过滤器。切向流过滤是另一种新兴的耦合渗透技术
膜过滤和流动,以从胶体基质中获得有效浓度的ev。

切向流动过滤(TFF)不同于传统的终端过滤,因为流体是切向流动的以避免滤饼的形成。事实上,通过终端过滤,较大的颗粒通常会堵塞膜孔,导致颗粒分离受损这是基于原始孔隙大小。TFF被评价为一种基于大小的EV浓度方法,能够处理可伸缩量的生物液体。UC和TFF的并行比较处理大量的条件细胞培养基进行。最后,TFF的能力为了处理从病人抽脂液中提取的液体进行了评估。在各种临床相关的生物基质,脂肪组织尤其相关。脂肪组织调节多种代谢过程和是一个来源间充质干细胞分泌广泛的选择可溶性因子和具有再生特性的.

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