mRNA转染的优势

1. 高效且可控的表达：mRNA能迅速翻译为蛋白质，表达短暂且可控，降低过度表达风险。
2. 细胞友好：mRNA引入细胞内不易造成损伤。
3. 安全性与低免疫原性：mRNA不整合入宿主基因组，降低基因突变风险，降解产物为细胞自然成分。
4. 快速响应与灵活性：mRNA快速合成能力使科学家能迅速调整实验方案。

IVT的主要步骤

模板制备

• 以质粒DNA为起点，通过琼脂糖电泳鉴定质粒。
• 选择超螺旋状态最佳的菌株，进行线性化质粒，选择合适的限制性内切酶（如BsaI）进行切割。

酶法加帽

• IVT后，使用牛痘病毒加帽酶和mRNA 2′-O-甲基转移酶为mRNA加帽，增强稳定性。

转录反应

• 准备线性化质粒模板，加入转录缓冲液、NTPs和RNA聚合酶，在37°C孵育合成大量mRNA。

纯化

• 采用柱纯化、磁珠纯化或酚/氯仿纯化等方法，去除杂质，提取纯净的mRNA。

定量与检测

• 使用紫外吸收法、染料法或毛细管电泳法对mRNA进行定量和纯度检测。

共转录法加帽

• 为提高效率，可在IVT过程中直接加入帽子类似物，实现转录与加帽同步进行。

 IVT的主要试剂

转染试剂选择

ProteanFect

• 首款基于蛋白递送的转染试剂，非常适合mRNA转染。
• 在多种难转染细胞系中效率显著优于lipofectamine。

ProteanFect在难转细胞中的应用

• 在Jurkat T细胞中，ProteanFect展现出对多种类型核酸的高效递送能力。