小鼠原代T细胞一般从脾脏组织中得到，包括脾脏研磨、细胞分离、纯化T细胞等步骤。以下是常用的小鼠原代T细胞提取流程：
实验前准备
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材料与试剂：新鲜小鼠脾脏、PBS缓冲液、无菌手术器械（剪刀、镊子等）、细胞过滤器、CD4/CD8磁珠分选试剂（如需纯化特定亚型），或阴选的方式去除B细胞、单核细胞、NK细胞的磁珠分选试剂，RPMI-1640培养基，人白介素2，胎牛血清，抗生素（如青霉素-链霉素）。
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设备：无菌操作台、离心机、磁力分选架。
从小鼠脾脏获取单细胞悬液
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小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5分钟，取出小鼠置于无菌操作台上，左腹侧朝上。
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在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。
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在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离下面的结缔组织，取出脾脏，剥去周围的结缔组织，期间用含有2%FBS的PBS溶液保持脾脏湿润。
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将脾脏放于70UM过滤网中，用注射器针芯轻轻研压脾脏，用含2%FBS的PBS冲洗过滤网，获细胞悬液。
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300G离心5分钟，收集细胞沉淀，然后加入红细胞裂解液裂解，将红细胞充分裂解，收集白细胞。
从单细胞悬液中分离小鼠原代T细胞
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全T细胞分离：利用阴选的方式去除B细胞、单核细胞、NK细胞等，按照分选试剂盒的说明书进行。
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亚群分离（如需要CD4+或CD8+ T细胞）：
培养与检测
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将分离的T细胞重悬于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，并加入抗生素与人白介素2。
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细胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML，放入37°C、5% CO2培养箱中进行培养。
转染
西湖凝聚体推出针对小鼠原代T的PT03 PROTEANFECT MAX小鼠原代T细胞转染试剂盒。使用ProteanFect Max递送EGFP mRNA至小鼠原代T细胞，实现高效表达。
企业介绍
华雅思创生物®专注于提供CGT、分子诊断和先进医疗的生物试剂和医疗耗材产品，服务客户遍及细胞治疗、疫苗抗体、医疗诊断、脑科学、合成生物、长寿研究和医美保健等领域。”买试剂，找华雅”，华雅思创生物®凭借深厚的技术实力和严格的质量控制体系，已成为众多科研机构和生物制药企业的首选供应商。
