UID转录组建库试剂盒

• 省时  同时构建8个文库仅5小时，时间节省30％
• 省力  无需第二链合成等步聚，操作简便
• 省心  建库起始量低至100ng
• 精确  测序结果与qPCR结果高度一致

      转录组为特定细胞在某一功能状态下转录出来的所有 RNA，主要包括mRNA，某些情况下也包括非编码 RNA。转录组测序利用高通量测序技术，快速且全面地揭示某一物种特定细胞或组织在某一状态下的几乎所有转录本信息，包括转录本表达量、可变剪接体、可变 polyA 位点等。

      绝对定量转录组测序（KC-DigitalRNA-seq），在文库扩增之前为每一条 RNA 片段加上特有的身份标签（Unique Identifier，UID）。那么同一个片段扩增出来的产物均带有相同的标签，而天然重复片段则带有不同的标签。测序完成后利用 UID 过滤数据，将相同标记的扩增产物进行合并，就能准确去除 PCR 扩增重复、同时保留样本的天然重复，一比一准确还原样本扩增前的原始状态。在此过程中，PCR 扩增和测序错误同样可以被纠正：扩增和测序的错误会使得相同 UID 标签对应多个不同的序列，那么只需比较这些序列的相似性，即可纠正这些错误。

测序结果对比

 KC-DigitalRNA 建库方法 VS 基于 dUTP 链特异性的 RNA 建库方法

     KC-DigitalRNA 建库方法采用独特的 splint ligation（单链加接头）方法，省去了 cDNA 第二链的合成、修复和加 A 的步骤，建库总时长缩短 1~2 小时。

测序数据分析

      raw data 进行质量控制后，测序数据（clean data）重复序列水平结果如下图所示：

        不计算 UID 特有识别序列时，重复次数为 1 的 reads（unique reads）的比例约为 18%，计算 UID 特有识别序列时，unique reads 的比例提高到约 28%。在总 reads 中，PCR 扩增产生的重复 reads 约占 10%。通过对多个样本的统计发现，在总 reads 中 PCR 扩增产生的重复 reads 约占 8%~11%。

KC-DigitalRNA 测序结果 VS 常规转录组测序结果

（1）常规转录组和 KC-DigitalRNA 测序筛选差异表达基因的结果

clean_up:常规转录组测序筛选获得的差异上调基因
UID_filter_up: KC-DigitalRNA 测序 UID 过滤后筛选获得的差异上调基因
clean_down:常规转录组测序筛选的差异下调基因
UID_filter_ down: KC-DigitalRNA 测序 UID 过滤后筛选获得的差异下调基因

（2）常规转录组和 KC-DigitalRNA 测序结果通过 qPCR 验证

     常规转录组测序与 qPCR 定量结果的相关系数 R2 为 0.859，KC-DigitalRNA 测序与 qPCR 定量结果的相关系数 R2 达到 0.985。

KC-DigitalRNA 建库方法不同起始量建库测序结果

    分别使用 100ng、500ng、1ug 作为建库起始量，并将不同建库起始量的测序结果进行相关性分析相，皮尔逊相关系数关系数 R2均在 0.97 以上。

A：unique reads比例提升。不计算UID标签序列时，重复次数为1的reads（unique reads）的比例约为18%，计算UID标签序列时，unique reads的比例提高到约28%。多个样本统计显示，在总reads中PCR扩增产生的重复约占8％－11％
B：与qPCR结果高度一致，分别用UID转录组建库测序和qPCR检测表达倍数变化，两种方法的结果相关性达到0.985

C：不同建库起始量相关性高。分别使用1ug、500ng、100ng起始量进行建库测序，不同起始量的结果皮尔逊相关系数R²均超过0.978

转录组建库试剂盒产品信息

      货号                                   名称                                                                                                     规格

DRO85－01        KC-Digital^TM Stranded mRNA-seq Library Prep Kit  for Illumina^{®                 24 rxn}

DRO85－02        KC-Digital^TM Stranded mRNA-seq Library Prep Kit  for Illumina^{®                 96 rxn}  

DLRO87－01       KC-Digital^TM Total RNA-seq Library Prep Kit for Illumina^{®                            24rxn}  

DLRO87－02       KC-Digital^TM Total RNA-seq Library Prep Kit for Illumina^{®                            96 rxn}