Lymphoprep
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产品名称: Stemcell 07851 Lymphoprep 淋巴细胞分离液
产品货号: 07851
淋巴细胞分离液Lymphoprep即用型
Lymphoprep是一种无菌、内毒素含量低的即用型分离液,是目前国内外分离正常人或病人外周血单个核细胞(PBMC:Mononuclear cells of Peripheral blood)(包括单核细胞monocytes和淋巴细胞lymphocytes)的常用方法,具有与昂贵的GE公司的PLUS或PREMIUM分离液同样的指标。
工作原理
PBMC与血液中的其他成分存在密度差异,利用密度在1.077±0.001g/ml之间而且近于等渗的LymphoprepTM溶液作密度梯度离心时,红细胞和粒细胞由于密度大,故沉于分离液底部。PBMC密度稍低于分离液,故位于分离液界面上,获得PBMC。LymphoprepTM分离液含有多糖(polysacccharide),多糖能粘附在细胞表面,使红细胞和粒细胞聚集下沉,但它对淋巴细胞的活性和红细胞和粒细胞进一步分离有负面影响。
注意事项:
该分离液仅适用于人体的外周血液,不适用于动物。
使用该分离液时,需将待分离的血液用生理盐水做等体积的稀释。
分离液的保存应置于无菌环境,并避光保存。
详细操作步骤见产品说明书。
技术参数
成分:泛影葡胺钠(Sodium diatrizoate):9.1% (w/v);多糖:5.7% (w/v)
密度:1.077±0.001g/ml
渗透性:290±15mOsm
内毒素含量:<1.0EU/ml
分离所得PBMC中红细胞的含量:整个细胞数目的3-10%。
操作步骤(仅供参考)
第一步、
在含有抗凝剂(EDTA、heparin、或ACD)的管子内收集血液,或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后,后续实验的要求,一般选取EDTA即可。
第二步、
用等体积的0.9%的NaCl溶液(即生理盐水)稀释血液。
第三步、
在12-15ml的离心管内,将6ml稀释后的血液铺在3ml分离介质Lymphoprep上。
此处铺层可以采用从上面铺,或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起,要界面分层清晰。
第四步、
在室温下——20摄氏度左右,用水平转子,800g的离心力,离心20分钟。(如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起,离心时间延长为30分钟)。
第五步、
离心前和离心后,离心管内液体分层如下图所示。
离心后,离心管内位于血液和分离液界面处的明显的一层即为淋巴细胞层。
用移液管直接吸取淋巴细胞层,注意,不要去除上面的血液层,而是直接吸取。移至另一离心管中。
第六步、
用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液(生理盐水)稀释收集到的淋巴细胞,在250g-300g的离心力下,离心10分钟,(此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml,体积过大,会降低淋巴细胞的产率),收集沉淀,即得到所需的人外周血单个核细胞,即可用于后续的实验。
产品名称: Stemcell 07851 Lymphoprep 淋巴细胞分离液
产品货号: 07851
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