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贴壁细胞转染优选:ProteanFect转染试剂盒 现货代理

01. 贴壁VS悬浮转染区别

贴壁转染与悬浮转染在操作流程、时间成本、转染效率、操作难度、细胞用量、观察难度和适用场景上有所区别。贴壁转染通常需要较长时间等待细胞贴壁,但操作简单,转染效率高,适合常规转染实验和需要高效率转染的场景。悬浮转染则时间成本较短,细胞用量更灵活,适合快速筛选实验和大规模转染。

02. 细胞培养与准备

以LX2细胞为例,这是一种人类肝星状细胞的永生化细胞系,广泛用于肝脏研究。LX2细胞贴壁生长,呈上皮细胞样。培养基成分为DMEM培养基,含10%胎牛血清和1%双抗。转染前,确保细胞处于良好生长状态,活率需超过90%。调整细胞转染密度时,避免反复离心,以免影响细胞活力和转染效率。

03. 转染操作

3.1 细胞准备

  • 提前一天种板,准备贴壁细胞。
  • 在96孔板中加入约2.5×10^4细胞,细胞过夜贴壁。
  • 待细胞汇合度为70%-80%时,弃去培养基后,用Opti-MEM轻柔清洗细胞两次,并加入20 μL Opti-MEM备用。

3.2 配置ProteanFect转染体系

  • 在40 μL Reagent A中加入0.5 μg EGFP mRNA,充分混匀。
  • 往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混匀。

3.3 转染

  • 将上述ProteanFect转染液加入细胞。
  • 37℃培养箱孵育60分钟。
  • 弃转染液(为避免细胞损失,无需完全弃尽)。
  • 加入200 μL完全培养基继续培养,24小时后检测EGFP mRNA表达,48小时后检测GFP pDNA表达。

04. 转染检测

使用ProteanFect试剂盒转染LX2细胞后,可以通过荧光显微镜观察EGFP的表达,评估转染效率和细胞形态。细胞活率可通过镜下观察、台盼蓝染色或流式细胞术等方法检测。

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