产品英文名称：HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2
产品中文名称：HiLyte  FluorTM 555 荧光素标记试剂盒- NH2

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 产品特性
整个标记过程仅需1个小时                         
整个标记过程在1支过滤管中进行              
荧光标记抗体回收率高                                                
适用于50-200 μg的IgG

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 产品描述
该试剂盒主要用于制备红色荧光标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和示踪用胞内蛋白。
用NH2-reactive HiLyte FluorTM * 555是试剂盒的成分之一，它有一个琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 555最多能够标记200 μg的IgG，每个IgG分子与4-6个HiLyte FluorTM 555分子共价结合。标记过程十分简单，只需要在特制的过滤膜上将NH2-reactive HiLyte FluorTM 555加入到IgG溶液中，然后在37℃下培养10分钟。过量的HiLyte FluorTM 555能够用过滤管除去。被HiLyte FluorTM 555标记后的IgG的激发和发射波长分别为555 nm和570 nm。
* HiLyte FluorTM 为AnaSpec,Inc公司的商标

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 试剂盒内容
NH2-reactive HiLyte FluorTM 555…….. 3管                      
Reaction buffer………………………… 0.5 ml × 1管           
WS buffer……. ….….4 ml × 1瓶
Filtration tube……… 3管

标记IgG操作步骤
（1）将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）
（2）8,000-10,000 g离心10分钟。 b）
（3）将10 μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM 555中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）将100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）
（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。
（6）将100 μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000 g离心10分钟，b）除去滤液。
（7）将200 μl WS buffer加入到过滤管中，8,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。
（8）将200 μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5 ml试管中，在0-5℃下保存。
a）样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于1 mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400 μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。
c）NH2-reactive HiLyte FluorTM 555在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打数次使其溶解。
d）如果IgG的量为200 μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液。
e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。HiLyte FluorTM 555/IgG比率的测定：
测定HiLyte FluorTM 555标记抗体溶液在280 nm以及555 nm处的吸光度，用以下公式计算比率：
比率（每个IgG分子结合的HiLyte FluorTM 555分子数）=1.4×A555/（A280-0.1×A555）
A555：555 nm处的吸光度       A280：280 nm处的吸光度

HiLyte  FluorTM 555 Labeling Kit - NH2 注意事项
用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
 在标记过程中，IgG或者HiLyte FluorTM 555-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。
 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒中）来纯化。
 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive HiLyte FluorTM 555放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。