NK 细胞添加剂升级方案（NK2.0）

ALyS505NK-AC 和ALyS505NK-EX 培养基进行 人类NK 细胞培养之标准操注意事项:
ALyS505NK(AC/EX)是专为细胞免疫治疗研究而开发，不含有动物蛋白质成
分，含有重组或医疗级人类蛋白质的无血清细胞培养基，对人类 NK 细胞具有高增
殖性，适用于 NK 细胞的活化与扩增，是细胞免疫治疗用最佳培养基。

【注意事项】
1、培养瓶
（1）由于部分患者 NK 细胞在诱导培养时候可能会有贴壁现象，为了避免此现象，
建议使用悬浮培养专用的 75cm2;225cm2细胞培养瓶（未经过 TC 处理或者表面
低吸附的细胞培养瓶）。
2、Lymactin-NK 抗体
(1)Lymactin-NK(2.4mg/mL生理盐水溶解)保存在-20摄氏度,使用前室温溶解尽快
使用，同时低速短时间离心保证抗体充分吸取使用。
(2) Lymactin-NK抗体培养瓶包被，轻轻摇晃培养瓶数分钟，让溶液在培养培养瓶
表面扩散。在室温下孵育 1 小时，若不能及时使用为避免抗体活性下降，
Lymactin-NK抗体保存在 4℃冰箱（一周内使用），直到使用前取出。
3、NK 细胞增殖诱导
（1）将血液采集至含有肝素钠抗凝剂的试管，为避免影响细胞活性下降，请于 2
小时内进行单个核细胞分离。室温离心力 800xg 离心 20 分钟。如果血液储存超过
2 小时，将离心时间增至 30 分钟。
(2)由于 IL-2 在 NK 细胞诱导分化及扩增作用非常重要，建议使用品质稳定的 IL-2
或进口品牌(推荐诺华品牌 Proleukin；22x106IU/vial 重组人类 IL-2)。
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（3）诱导 NK 细胞培养细胞密度达到 1~1.5×106个/ml 和 5%-10%的灭活血浆才有
利于 NK 细胞的启动。
(4)ALyS505NK-AC/EX 使用前，必须将培养基进行室温平衡或者水浴箱温育培
养基，避免低温对 NK 细胞生长的影响。
（5） 严格执行流程确保加入抗体、细胞因子、培养基的计量准确无误，避免各种
成分误差对 NK细胞生长的影响。
（6） 整个过程以静置培养为主，操作过多过猛会影响 NK细胞表型。
4、扩大培养
开始活化培养 7 天后，培养培养瓶里的细胞悬浮液移入培养袋里，注意一下：
（ 1 ） 细胞转移时，电动移液器轻轻吹打培养瓶壁，避免 NK细胞损伤。
（ 2 ） 有贴壁细胞黏贴瓶壁尽量用手掌轻轻拍打培养瓶，不易用力过猛，避免 NK
细胞损伤。
（ 3 ） 使用细胞袋建议培养液体积不超过 1000ml,才有利于 NK细胞的生长。
（ 4 ） 注意观察细胞培养液颜色的变化和细胞计数，避免细胞培养过程细胞死亡。
（ 5 ） 扩增 NK细胞 IL-2在培养基的含量是指每次新加入的培养基内的量，不是培
养体系总量含有浓度。