G418简介

G418的结构中包含双碱基环醇和2-脱氧链霉胺，它们通过糖苷键与氨基糖连接。G418的结构独特性源于 C-6 位置的羟基功能而不是氨基功能。这种差异使其能与80S核糖体复合物特异性结合，与其他非特异性结合真核细胞核糖体的氨基糖苷类药物相比，G418 抑制真核细胞蛋白合成的作用更强。而氨基糖苷类修饰酶，即氨基糖苷类磷酸转移酶（APH），可共价修饰抗生素（如G418）的氨基或羟基功能，削弱药物-核糖体的相互作用，从而妨碍G418发挥功能，即表现为耐药的效果。

当新霉素抗性基因被成功转染进真核细胞后，可获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。因此G418作为一种有效的真核翻译抑制剂，被广泛用于稳定转染新霉素抗性基因（表达氨基糖苷类修饰酶）的真核细胞的选择和维持。推荐常用的筛选浓度范围为 100-800 μg/mL。抗生素的有效杀伤浓度会因细胞类型、培养基、生长条件、细胞密度、细胞的代谢速率和所处的细胞周期而异。为了克服这些变量并确保成功，理想情况下，应通过实验确定每个特定的培养系统的工作浓度，以及引入新变量时的工作浓度。工作浓度可以通过绘制剂量反应曲线来确定。当在新的细胞系统中使用G418硫酸盐时，建议绘制全剂量曲线，并且在每次使用新批次的G418硫酸盐时，重制剂量曲线。

作用机制

G418的结构中含有双碱基环醇和2-脱氧链霉胺，这些结构通过糖苷键与氨基糖连接。G418的独特性来源于其C-6位置的羟基功能，而非氨基功能。这种结构上的差异使得G418能够与80S核糖体复合物特异性结合，相较于其他氨基糖苷类药物，G418对真核细胞蛋白质合成的抑制作用更为显著。

筛选应用

G418常被用于筛选表达氨基糖苷类修饰酶的细胞株。这些修饰酶，如氨基糖苷磷酸转移酶（APH），能够共价修饰G418的氨基或羟基功能，削弱药物与核糖体的相互作用，从而产生耐药效果。当真核细胞成功转染新霉素抗性基因后，它们能够高效表达氨基糖苷磷酸转移酶，获得在含有G418的选择性培养基中生长的能力。

推荐使用浓度

G418作为真核翻译抑制剂的推荐筛选浓度范围为100-800 μg/mL。然而，有效的杀伤浓度会因细胞类型、培养基、生长条件等多种因素而异。因此，为了确保筛选的成功，建议通过实验确定每个特定培养系统的工作浓度。

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