G418 sulfate
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G418(又称Geneticin,遗传霉素)是一种氨基糖苷类抗生素,氨基糖苷类药物与核糖体不可逆地结合,并通过破坏其校对能力导致翻译提前终止或错译,从而抑制蛋白质合成,阻止敏感
细胞的生长。G418对需氧和兼性需氧革兰氏阴性杆菌、一些革兰氏阳性菌以及真核细胞均具有氨基糖苷类毒性。因而常被用于筛选表达氨基糖苷类修饰酶的细胞株。
G418的结构中包含双碱基环醇和2-脱氧链霉胺,它们通过糖苷键与氨基糖连接。G418的结构独特性源于 C-6 位置的羟基功能而不是氨基功能。这种差异使其能与80S核糖体复合物特异性结合,与其他非特异性结合真核细胞核糖体的氨基糖苷类药物相比,G418 抑制真核细胞蛋白合成的作用更强。而氨基糖苷类修饰酶,即氨基糖苷类磷酸转移酶(APH),可共价修饰抗生素(如G418)的氨基或羟基功能,削弱药物-核糖体的相互作用,从而妨碍G418发挥功能,即表现为耐药的效果。
G418的结构中含有双碱基环醇和2-脱氧链霉胺,这些结构通过糖苷键与氨基糖连接。G418的独特性来源于其C-6位置的羟基功能,而非氨基功能。这种结构上的差异使得G418能够与80S核糖体复合物特异性结合,相较于其他氨基糖苷类药物,G418对真核细胞蛋白质合成的抑制作用更为显著。
G418常被用于筛选表达氨基糖苷类修饰酶的细胞株。这些修饰酶,如氨基糖苷磷酸转移酶(APH),能够共价修饰G418的氨基或羟基功能,削弱药物与核糖体的相互作用,从而产生耐药效果。当真核细胞成功转染新霉素抗性基因后,它们能够高效表达氨基糖苷磷酸转移酶,获得在含有G418的选择性培养基中生长的能力。
G418作为真核翻译抑制剂的推荐筛选浓度范围为100-800 μg/mL。然而,有效的杀伤浓度会因细胞类型、培养基、生长条件等多种因素而异。因此,为了确保筛选的成功,建议通过实验确定每个特定培养系统的工作浓度。
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